李连达 周庆保 李燕娜 高凤辉 刘志云

张金妹  李映欧  张京 王智  尚晓泓

活血化瘀冠心Ⅱ号方对冠心病及闭塞性脑血管有较好疗效[1~3]，实验研究证实具有多方面的药理作用[4~6]。最近从整体、细胞及分子水平进一步证实冠心Ⅱ号方及其有效成分具有调整心脏血流动力学，保护缺血心肌[7]，调节体外培养心肌细胞博动频率，保护心肌细胞缺氧性损伤[8]等作用。本文报道冠心Ⅱ号方及其有效成分对体外培养心肌细胞DNA合成的影响。

1 、 方法

心肌细胞培养方法见前文[9~11]，共用80瓶心肌细胞进行两批实验。每瓶放入1.5毫升细胞悬液，培养48小时后，换入含有各种药物的培养基，对照组则换入不含药的培养基，继续37度培养3小时，加入0.5 µci的³H-TdR50ul，再培养2小时。采用过氯酸法处理标本，即将掺入³H-TdR 各瓶心肌细胞中的液体弃去，用4~5毫升生理盐水轻轻冲洗3次，再将瓶中的水分吸干，待干燥后各瓶加浓过氯酸三滴，浓过氧化氢一滴置80度消化一小时，冷却后加入闪烁液5毫升，助溶剂3毫长（乙二醇独甲醚、乙二醇独乙醚），制成均相溶液，隔夜测量用美国Packarsl公司，TRL-CARB460CD液体闪烁谱仪测量溶液瓶的每分钟计数cpm，并进行统计学处理，以比较各种药物对心肌细胞DNA合成的影响。

90．2 实验用药

1、冠心Ⅱ号方，以培养基稀释最终浓度为250及500mg/ml,pH7.5,Na⁺132mEq/L,K⁺5.17mEq/L, Ca⁺⁺6.0mg%。

2、丹参酮Ⅱ_A磺酸钠：以培养本稀释最终浓度为10^-5M,pH7,Na⁺132Meq/L,K⁺5.37mEq/L, Ca⁺⁺7.0mEq%

3、没食子酸乙酯：最终浓度为10^-5M,pH7.2,Na⁺129.6mEq/L,K⁺4.98mEq/L,Ca⁺⁺9.5mEq%

4、川芎嗪；最终浓度10^-5M,pH6.5,Na⁺132mEq/L,K⁺5.13mEq/L,Ca⁺⁺8.0mEq%

5、心得安注射液（北京制药厂，批号770529,1mEq/ml,Ph5,无na,K,Ca离子）

6、地塞米松：天津和平制药厂，批号840813,2mg/ml,pH6.5,Na⁺96.8Mn/L,无K⁺

7、硫酸异丙肾上腺素注射液（北京制药厂，批号76101227、0.5mg/ml,pH4.16,Na⁺153Mn/L,无K⁺

8、³H-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR) ：上海原子能所提供，比放射性24 ci/ml ,0.5 ci/50 l/瓶。

3、  结果

地塞米松(10^-5M)对体外培养心肌细胞DNA合成有明显抑制作用，冠心Ⅱ号（250及500mg/ml ）及丹参酮Ⅱ_A磺酸钠有轻度抑制作用，没食子酸乙酯及异丙肾上腺素有抑制趋势，但无统计不差异。川芎嗪(10^-5M)及心得安(10^-5M)则未观察到明显影响见表90-1。

表90-1 冠心Ⅱ号方及其有效成分对心肌细胞DNA合成的影响

结果（cpm均值±标准误）

组别            剂量                 第一批                   第二批

对照组                            3786.76±925.08          550.00±90.83

冠心  号方组    250               2456.50±125.29          327.00±18.27

                500               1778.25±311.75          367.75±12.80

对照组                            8110.50±480.10          3164.67±348.76

丹参酮  磺酸钠 10^-5M             6810.00±305.00          2319.00±62.88

没食子酸乙酯    10^-5M             7401.67±478.84          2210.00±360.74

川芎嗪          10^-5M             8087.75±516.48          2856.50±239.64

心得安          10^-5M             7164.76±478.57          2768.50±58.79

地塞米松        10^-5M           4664.50±324.02***         1858.50±237.81

异丙肾上腺素    10^-5M            6879.00±441.89           2330.00±319.66

注:*0.1>p.0.05,**p<0.05,***p<0.001

 

4、讨论

大量研究证实冠心Ⅱ号及其有效成分通过调整血液循环功能及对心肌心胞的直接保护人用而减轻心肌缺血性损伤，但它对于已经损伤的心肌细胞有无促进修复及再生的作用有待研究。本实验以体外培养心肌细胞DNA合成为指标，未能完全证实冠心Ⅱ号方及其有效成份对心肌细胞DNA合成有促进作用。由于本实验为初步探索性质，心肌细胞培养时间，给药浓度及时间，以及³H-TdR 掺入时间，均采用单一条件，今后尚需研究不同给药浓度及时间等多种条件，特别是对已经损伤的心肌细胞DNA合成的影响，以例进一步阐明基作用机制。

参考文献

1 陈可冀：中医杂志，1979，（9）：563

2 中国医科院阜外医院，中医研究院西苑医院，中医药研究参考

3 中医研究院西苑医院内科心血管组，中医杂志

4 中医研究院西苑医院生化室冠心病组、中医系生化教研组，亲医药学杂志

5 中国医学科学院首都医院基础医学组，新医药学杂志

6 李连达，等，心肌细胞培养（内部资料）

7 李连达，等，中华心血管病杂志

8李连达，等，中医杂志

9中国科学院生物物理研究所液闪编辑组，液体闪烁计数及其在生物学中的应用。